Fluorescence mikroskop: prinsip métode

Diserep na ulang émisi tina cairan anorganik sarta organik lampu salajengna mangrupa hasil phosphorescence atanapi fluorescence. Beda antara fenomena teh mangrupa lilana interval antara nyerep tur émisi fluks lampu. Sabot fluorescence prosés ieu lumangsung ampir sakaligus, bari phosphorescence - kalawan sababaraha reureuh.

inpo sajarah

Dina 1852, élmuwan Inggris Stokes, mimiti dijelaskeun fluorescence. Anjeunna ngawanohkeun istilah anyar salaku hasil tina percobaan kalawan fluorspar, nu emit lampu beureum handapeun sinar ultraviolet. Stokes nyatet hiji fenomena metot. Hal ieu kapanggih yén panjang gelombang radiasi fluoresensi sok gede ti aliran tina lampu éksitasi.

Pikeun mastikeun null dina abad ka-19 aya geus loba percobaan. Éta némbongkeun yén rupa-rupa sampel fluoresce dina pangaruh sinar ultraviolet. Di antara bahan, diantara lain perkara, geus kristal, résin, mineral, klorofil, ubar atah, sanyawaan anorganik, vitamin, minyak. Pamakéan langsung tina dyes pikeun tés biologis mimiti ngan dina taun 1930

Fluorescence mikroskop: pedaran

Sababaraha bahan dipaké dina satengah mimitina tina studi abad ka-20 exhibited spésifisitas tinggi. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Hatur nuhun kana kinerja nu teu bisa kahontal ku kontras métode, metoda mikroskop fluorescence geus jadi alat penting dina panalungtikan Kalautan sarta biologis. Sarua hasil penting anu diala, sarta pikeun bahan.

? kaunggulan naon teu metoda mikroskop fluorescence? Ngagunakeun bahan anyar geus jadi mungkin jeung Pilihan komponén submicroscopic sél kacida husus. Fluorescence mikroskop bisa ngadeteksi molekul tunggal. A-rupa dyes ngidinan idéntifikasi tina sababaraha item sakaligus. Sanajan resolusi spasial kawates ti wates difraksi sahiji alat-alat, nu, kahareupna gumantung kana sipat husus tina sampel, identifikasi molekul handap tingkat ieu kaitung mungkin. Variasi sampel sanggeus autofluorescence irradiation némbongkeun. fenomena ieu loba dipaké dina petrology, botani, industri semikonduktor.

fitur

Diajar jaringan sato atawa patogén mindeng pajeulit atawa teuing lemah atawa pisan kuat unspecific autofluorescence. Sanajan kitu, peunteun dina studi acquires bubuka kana komponén bahan gumbira dina panjang gelombang husus sarta emitting inténsitas aliran caang perlu. Fluorochromes meta salaku dyes sanggup bebas napel strukturna (ditingali atawa siluman). Kituna maranéhna boga selectivity tinggi mun udagan, jeung ngahasilkeun kuantum.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluorescence mikroskop geus loba dipaké saprak mecenghulna dyes alam jeung sintétis. Aranjeunna kasurupan propil inténsitas tangtu tina émisi na éksitasi sarta sasaran pikeun target biologis husus.

Idéntifikasi molekul individu

Sering, dina kondisi ideal, anjeun tiasa ngadaptarkeun glow unsur misah. Keur kitu, diantara lain perkara, perlu nyadiakeun hiji noise sahingga low tina detektor jeung tukang optik. molekul Fluorescein kana gagalna alatan photobleaching tiasa emit nepi ka 300 rébu. Foton. Dina 20% efisiensi kumpulan prosés jeung bisa ngadaptar aranjeunna dina jumlah ngeunaan 60 sarébu.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Fluorescence mikroskop dumasar photodiodes longsoran atanapi multiplication éléktronik, diwenangkeun panalungtik pikeun niténan paripolah molekul individu ngaliwatan kadua, sarta dina sababaraha kasus malah menit.

pajeulitna

Hiji masalah konci dina kahadean di suprési tukang noise optik. Alatan kanyataan yén loba bahan dipake dina desain mamah jeung lenses némbongkeun sababaraha autofluorescence, usaha élmuwan dina tahap awal anu mihak ka produksi komponén gaduh fluorescence low. Sanajan kitu, percobaan saterusna geus ngarah ka conclusions anyar. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Dina sababaraha hal, eta ieu kapanggih yén mikroskop fluorescence, dumasar total cerminan internal, hal ieu ngamungkinkeun pikeun ngahontal latar lemah sareng lampu éksitasi inténsitas tinggi.

lantaran make mesin

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Prinsip mikroskop fluorescence, dumasar total cerminan internal nya éta ngagunakeun gelombang evanescent atanapi evanescent. Ieu lumangsung di wates antara média kalawan béda indéks réfraktif. Dina hal ieu, anu pancaran cahaya ngaliwatan prisma anu. Mibanda tinggi réfraktif parameter indeks.

prisma anu tepung wates jeung leyuran cai atawa kaca mibanda parameter low. Mun hiji beam cahaya diarahkeun di dinya di hiji sudut anu leuwih kritis, beam keur sagemblengna reflected tina panganteur anu. fenomena kieu, kahareupna ngabalukarkeun gelombang nonpropagating. Dina basa sejen, médan éléktromagnétik nu dihasilkeun nu penetrates kana medium sareng handap réfraktif indéks parameter pikeun jarak kurang ti 200 nanométer.

Gelombang evanescent inténsitas cahaya bakal jadi cukup pikeun ngagumbirakeun fluorophores. Sanajan kitu, kusabab jero pisan leutik na, volume na bakal saeutik pisan. hasilna mangrupakeun tukang-tingkat low.

modipikasi

Fluorescence mikroskop anu dumasar kana total cerminan internal, bisa dilaksanakeun kalawan epi-katerangan. Ieu merlukeun lenses kalawan aperture numeris tinggi (sahanteuna 1,4, tapi éta desirable yén éta ngahontal 1.45-1.6), sarta sawaréh bercahya aparat widang. dimungkinkeun dina kahontal ku ukuranana titik leutik. Pikeun uniformity gede maké cingcin ipis, nu geus dipeungpeuk ku nyangkokkeun sabagian stream teh. Pikeun sudut kritis, satutasna aya hiji cerminan total, urang perlu tingkat tinggi réfraksi dina médium immersion di lénsa jeung kaca panutup tina mikroskop.